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液相色譜柱使用前注意事項
2022-06-07 16:03
  液相色譜柱,是一種用於液體色譜分析儀器。
  1、 色譜柱的使用說明:
  (1)、色譜柱使用前注意事項:色譜柱的儲存液無特殊說明,均為評價報告所示的流動相。在使用前,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩衝液作洗脫劑,應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩衝液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱。
  (2)、流動相:流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好,尤其是含鹽的流動相。另外,裝流動相的容器和色譜係統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。以常規矽膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用範圍是2.0-8.0,BDS C18適合於堿性化合物,PH值適用範圍為2.0-10.0。當必液相色譜柱使用前注意事項須要在PH值適用範圍的邊界條件下使用色譜柱時,每次使用結束後立即用適合於色譜柱儲存並與所使用的流動相互溶的溶劑清洗,並完全置換掉原來所使用的流動相。
  (3)、樣品:樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預處理柱(SPE)對樣品進行預處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時,所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。
  2、 色譜柱的保存
  (1)、反相色譜柱每天實驗後的保養:使用緩衝液或含鹽的流動相,實驗完成後應用10%的甲醇/水衝洗30分鍾,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇衝洗30分鍾。注意:不能用純水衝洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料衝塌陷。
  (2)、長期保存色譜柱:如色譜柱要長時間保存,必須存於合適的溶劑下。對於反相柱可以儲存於純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存於嚴格脫水後的純正己烷中,離子交換柱可以儲存於水(含防腐劑疊dan化鈉 )中,並將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。
  3、 色譜柱的再生因為色譜柱是消耗品,隨著使用時間或進樣次數的增加,會出現色譜峰高降低,峰寬加大或出現肩峰的現象,一般來說可能是柱效下降。
  (1)、反相柱的再生:依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇:水=10:90 (V/V),乙腈,異丙醇作為流動相衝洗色譜柱,完成後再以相反順序衝洗色譜柱。
  (2)、正相柱的再生:依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相衝洗色譜柱,然後再以相反的順序衝洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
  4、 色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法
  色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,屬於正常現象。但柱壓在使用過程中突然升高(係統管路堵塞及壓力傳感器故障除外),可能的原因有如下幾點:
  (1)、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或汙染;
  (2)、色譜柱頭的填料被樣品汙染;
  (3)、色譜柱內緩衝液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結晶析出;
  (4)、流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。
  解決辦法如下:
  (1)、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被汙染,可以將色譜柱反方向用甲醇衝洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內超聲清洗10分鍾,後再用純水超聲10分鍾,重新裝入色譜柱。
  (2)、如確定色譜柱頭的填料被汙染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內前段被汙染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修複後,重新安裝上柱頭螺絲。
  (3)、如確定定是鹽結晶,用10%的甲醇/水衝洗色譜柱使柱內鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。
  (4)、如果因PH值使用不當,很難恢複。
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